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          铁甲量测的含定果酸齐墩草中
          2025-05-14 16:06:16

          目的铁甲

          建立铁甲草中大黄素和齐墩果酸的含量测定方法。

          方法

          采用HPC法测定铁甲草中齐墩果酸的草中含量。WatersXBridgePeptideBEHC18(4.6mm×250mm,齐墩5μm),果酸流动相为甲醇-PBS(85∶15),含定流速1.0mL/min,量测柱温35℃,铁甲进样量为10μL,草中检测波长210nm,齐墩测定齐墩果酸的果酸含量。结果:齐墩果酸在5~50μg/mL的含定浓度范内呈良好线性关系(Y=4533X+909.6,R=0.9996),量测平均回收率为99.39%,铁甲RSD为1.53%(n=6)。草中

          结论

          本实验方法准确灵敏、齐墩稳定可靠,可用于铁甲草中齐墩果酸的含量测定。

          铁甲草(CassiamimosoidesLinn.)为豆科(Leguminousae)决明属一年或多年生亚灌木状草本植物,以全草入药,主要分布于广东、福建、云南、台湾、贵州和广西等地,其味甘、性平,具有清肝明目、散瘀化积的功效。有研究结果表明,铁甲草能够有效抑制脂肪酶,防止脂肪肝;其主要化学成分有大黄素、齐墩果酸、β-谷甾醇、木犀草素、槲皮素等。然而,目前国内外对铁甲草的研究主要集中在化学成分和药理作用方面,有关铁甲草药材质量控制的研究很少,且未见对其有效成分进行含量测定的报道。本实验以铁甲草中具有抗炎保肝的有效成分齐墩果酸,作为定量检测指标成分,建立铁甲草中齐墩果酸的HPLC含量测定方法,为铁甲草的质量控制和合理开发提供参考依据。

          1仪器与材料

          WatersAlliance2695型高效液相色谱仪;WatersXBridgePeptideBEHC18(4.6mm×250mm,5μm);WJX-A1000型高速多功能粉碎机;JP-100S型超声波清洗器;MING-CHE24UV超纯水机。

          齐墩果酸对照品(C1723001);铁甲草采于广东省梅州市蕉岭县,经嘉应学院医学院生药学翟明老师鉴定为豆科决明属植物铁甲草(Cassiamimosoides)的全草;其他试剂均为分析纯。

          2方法及结果

          2.1对照品溶液的制备

          精密称取齐墩果酸对照品1mg,置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,即得。

          2.2供试品溶液的制备

          称取铁甲草粗粉2g,加入2moL/L的盐酸10mL,充分浸润后,在60℃水浴下,酸水解2h,滤渣用超纯水水洗至中性,干燥后加入10倍量的90%的乙醇溶液和0.5%NaOH溶液,调节pH值至8,50℃超声30min,抽滤后,水浴加热浓缩成浸膏。

          浸膏用甲醇超声溶解后,离心取上清液,定容至10mL,即得。

          2.3色谱条件

          色谱柱:WatersXBridgePeptideBEHC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇:PBS=85∶15;检测波长:210nm;流速:1.0mL/min;进样量:10μL,柱温:35℃。

          2.4线性关系考察

          分别精密吸取“2.1”项下的齐墩果酸对照品0.5、1、2、3、4、5mL溶液于10mL容量瓶中,用甲醇定容,得浓度为5、10、20、30、40、50μg/mL系列浓度的齐墩果酸对照品溶液,于“2.3”项下的色谱条件,以齐墩果酸对照品溶液色谱峰面积Y为纵坐标,齐墩果酸对照品浓度X(μg/mL)为横坐标,进行线性拟合,得齐墩果酸标准曲线,求得回归方程Y=4533X+909.6,R=0.9996。结果表明,在5~50μg/mL的浓度范围内,齐墩果酸对照品溶液的峰面积与浓度的线性关系良好。

          2.5专属性考察

          取项目“2.1”和“2.2”项所制备的对照品溶液和供试品溶液,在“2.3”的色谱条件下进样,齐墩果酸的保留时间约为13.77min,峰型稳定,分离度良好,有较好的基线分离,未见杂质峰干扰,具有良好的专属性。如图1所示。

          1
          2.6仪器精密度试验

          精密吸取对照品溶液1.0mL,于“2.3”项的色谱条件下,连续重复进样6次,每次10μL,检测得到大黄素峰面积的RSD为1.36%,表明仪器精密度良好。

          2.7稳定性试验

          精密吸取供试品溶液1.0mL,分别于0、2、4、6、8、12h于“2.3”项色谱条件下进样,检测得到齐墩果酸的峰面积的RSD为0.82%。表明供试品溶液在12h内稳定。

          2.8重复性试验

          精密称取6份等质量铁甲草粗粉2.00g,按“2.2”项下的方法平行制备6份供试品溶液,于“2.3”项的色谱条件,检测得到齐墩果酸峰面积的RSD为1.47%。表明该方法重复性良好。

          2.9加样回收率试验

          精密称取已知含量的等质量铁甲草粗粉6份,每份2.00g,分别精密加入同一浓度的齐墩果酸对照品,按上述“2.2”的提取方法平行制备成供试品溶液,于“2.3”项色谱条件下测定,计算得到平均回收率结果为99.39%,RSD为1.53%。表明该方法测得的结果有良好准确性。结果见表1。

          2
          2.10样品含量测定

          精密称取3份不同批药材各2.00g,按照“2.2”项的制备方法制备成供试品溶液,每份样品分别在“2.3”项的色谱条件下进样三次,记录峰面积,计算样品中齐墩果酸的含量。结果见表2。

          3
          3讨论

          在考察齐墩果酸的色谱条件时,曾采用甲醇水,甲醇-0.1%甲酸和甲醇-PBS作为流动相,考察结果显示,当流动相选择为甲醇-PBS(85∶15)时,样品中齐墩果酸分离度更好,峰型稳定,无杂峰干扰。由于齐墩果酸同时含有羟基和羧基基团,在碱性条件下更易被提取,在提取条件的考察过程中,发现加入适量碱溶液使其pH值至8时,更利于齐墩果酸成分的提取。

          本实验建立应用高效液相色谱法测定铁甲草中齐墩果酸含量的方法,方法精密度高、稳定性、重复性、加样回收率均符合方法学验证的要求。测得3批样品中,齐墩果酸的含量在3.67%~3.73%之间,含量较高,且齐墩果酸在临床上主要用于护肝降酶,与铁甲草的功效相符,说明齐墩果酸适合作为铁甲草的质量检测指标成分,该方法可作为铁甲草质量控制的方法,从而为铁甲草质量标准的制订提供参考依据。

          声明:本文所用图片、文字来源《中国民族民间医药》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除

          相关链接:齐墩果酸大黄素对照品

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